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科研ELISA试剂盒实验背景深全部呈有色原因及解决方案

科研ELISA试剂盒实验中,背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)

根据技术分析,可能存在的原因有一下几条:

1、样品稀释液污染

  解决办法:弃去稀释液,重新配置

 

2、吸头重复使用,未洗净或消毒不彻底

  解决办法:吸头尽可能一次性使用

 

3、不正确的孵育时间,温度(尤其是底物孵育的时间)

  解决办法:zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。完全按照说明书要求

 

4、偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高

  解决办法:按照说明书调整到合适的浓度

 

5、ELISA板子不正确的贮存

  解决办法:酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板

6、实验过程中洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留

  解决办法:洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。

7、底物污染,未避光保存,出现颜色

解决办法:弃去底物,重新配置

8、没有正确封闭

  解决办法:在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

 

9、样本溶血严重

  解决办法:建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。

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