大乐透走势图

技术文章

裸鼠白细胞介素ELISA试剂盒固体样本的收集

固体样本的收集 :

1、组织标本:切割标本后,称取 1g 组织,加入 9ml 的 pH7。2-7。4 左右的 PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清。分装一 份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨。

2、细胞内蛋白样本:许多待测蛋白不是分泌蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。

(1)培养的细胞

A、动物细胞:用 PH7。2-7。4 的 PBS 稀释细胞悬液,使细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用超声波破碎),以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

B、植物细胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀释细胞悬液,使细胞浓度达到 100 万/ml 左右,置于冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎 2s,冷却 30s 的方式,充分破碎细胞,以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

(2)组织的细胞

切割标本后,称取 1g 组织,加入 9ml 的 pH7。2-7。4 左右的 PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),去除上清,再用 pH7。2-7。4左右的 PBS 小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

3、细胞内蛋白样本:许多待测蛋白不是分泌蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。

4、咽拭子:加入 2ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,溶解咽拭子头部,摇匀,用镊子取出咽拭子并挤干液体,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。

5、植物标本:取组织块(0.2g~0.5g)少可到 5~10mg 在冰冷的 PBS 中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入 5ml 的匀浆管中;按重量(mg):体积(ml)=1:9 的比例加入 9 倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块;匀浆的方式:手工匀浆,机器匀浆。 ① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8 分钟),充分研碎,制成 20%的匀浆液。 ② 机器匀浆:用组织捣碎机 10000~15000 转/分 上下研磨制成 10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间 10 秒/次,间隙 30 秒,连续 3~5 次,在冰水中进行,可适当延长匀浆时间),镜检观察:取少量组织匀浆作涂片(直接涂片、染色均可以),显微镜下观察细胞是否破碎,若没有则可延长匀浆时间。将制备好的 10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机 4000 转/分左右,离心 10~15 分钟,取上清液进行测定。

上海谷研热门搜索:人ELISA试剂盒,羊ELISA试剂盒,仓鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒
Copyright@ 2018-2019 上海谷研实业有限公司 版权所有 地址:上海松江区莘砖公路1290号 邮编:201603
在线客服
电话
021-39921927
021-39596320
手机
18321818584
15026555973
五分彩app下载 五分彩app下载 江西快3 北京快三走势图 五分彩app下载 江西快3 江西快三走势图 金蟾捕鱼app 江西快三走势图 五省快3走势图