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兔抗豚鼠IgG-FITC抗体

产品名称: 兔抗豚鼠IgG-FITC抗体
更新时间: 2017-04-13
产品型号:
产品特点: 兔抗豚鼠IgG-FITC抗体,抗体种类,多种试剂现货供应!

兔抗豚鼠IgG-FITC抗体 的详细介绍

兔抗豚鼠IgG-FITC抗体现货促销,兔抗豚鼠IgG-FITC抗体用于免疫组化实验,WB实验,相应的标记抗体有HRP标记抗体,FITC标记,BIO等。

【贮存条件】: 贮存于-20℃. 本品应在低温下保存,长时间在暴露在空气中,含量会有所降低。

规格:0.5ml

材料和方法

  1。1 材料 人成骨肉瘤MG63细胞为本实验室保存。重组质粒MycSSH1L(WT)、MycSSH1L(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王岩教授惠赠。脂质体 2000( Invitrogen公司)。高糖DMEM培养基(美国Gibco 公司),胎牛血清(Hyclone公司),胰蛋白酶和EDTA(Sigma 公司)。A23187,KN93,CaM,重组Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain,Calbiochem)。抗体:Myc (9E10;Roche),HA (3F10;Roche),Pcofilin,Cofilin(Santa Cruz), CaMKⅡδ1δ4 (Trans Genic Inc。),PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免疫共沉淀(Protein Gagarose)试剂盒(迈晨科技有限公司)。

  1.2 蛋白印迹实验 MG63细胞铺于35 mmol/L培养皿中,待细胞密度达到60%~70%时,转染MycSSH1L,48 h后换无血清培养基培养3 h,分别加入浓度为0.5,1,2.5,5 μmol/L的A23187孵育10 min后裂解细胞,离心取上清加入凝胶加样缓冲液,沸水浴上加热5 min,上样、电泳、转膜、杂交〔一抗分别为Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(14)〕、ECL显色。

  1.3 体外激酶测定 MycSSH1L(WT)及其突变体MycSSH1L(2 SA)分别转染至MG63细胞,48 h后采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)试剂盒的方法及抗cmyc抗体,对照组为抗IgG抗体。回收MycSSH1L,加入0.6 μg/ml重组活性CaMKⅡ(单独或同时加入抑制剂KN93)以及100 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 于 20 μl 激酶反应缓冲液中,30℃反应40 min。反应产物进行SDSPAGE电泳、转膜,应用放射自显影技术检测32P 标记的SSH1L水平。

  1.4 体外SSH1L磷酸酶活性测定实验 MycSSH1L(WT)或MycSSH1L (2 SA)转染至MG63细胞,48 h后,采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)试剂盒的方法及抗cmyc抗体,对照组为抗IgG抗体。回收MycSSH1L,加入0.6 μg/ml CaMKⅡ(单独或同时加入抑制剂KN93),20 μg/ml CaM,以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 于 20 μl 反应缓冲液(50 mol/L HEPES,pH 7.4,0.1 mol/L CaCl2,0.5 mol/L EDTA,3 mol/L MgCl2,100 mmol/L NaCl,1 mol/L dithiothreitol,0.5 mg/ml BSA,1 μg/ml leupeptin),中30℃反应2 h。反应产物进行SDSPAGE电泳、转膜、杂交(一抗分别为Pcofilin,Cofilin, cmyc 抗体)、ECL显色。

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